白头翁皂苷B4对肝癌细胞Huh-7及其荷瘤裸鼠肿瘤的抑制作用及机制研究

目的:研究白头翁皂苷B4(AB4)对肝癌细胞Huh-7及其荷瘤裸鼠肿瘤的抑制作用及机制。方法:将Huh-7细胞分为AB4给药组、阴性对照组(等体积培养液)、阳性对照组(5-氟尿嘧啶50μmol/L),运用MTT法检测0、3、6、12、25、50、100、200、400、800、1 600μmol/L AB4作用Huh-7细胞12、24、36、48 h的增殖抑制率,计算半数抑制浓度(IC50);克隆形成试验评估50μmol/L AB4作用Huh-7细胞24 h的克隆细胞数;膜联蛋白Ⅴ-异硫氰酸荧光素/碘化丙啶(AnnexinⅤ-FITC/PI)染色检测50μmol/L AB4作用Huh-7细胞24 h的细胞凋亡率;Western blot法检测50μmol/L AB4作用Huh-7细胞24 h后B细胞淋巴瘤2(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)、胱天蛋白酶3(Caspase-3)、活化胱天蛋白酶3(Cleaved Caspase-3)、活化多腺苷二磷酸核糖聚合酶(Cleaved PARP)等凋亡蛋白的表达。将荷瘤裸鼠随机分为阴性对照组(生理盐水)、阳性对照组(5-氟尿嘧啶50 mg/kg)和AB4低、中、高剂量组(25、50、100mg/kg),每组3只,每天腹腔注射相应药物1次,连续19 d,观察裸鼠肿瘤生长情况,计算抑瘤率;苏木精-伊红(HE)染色观察肿瘤细胞形态变化。结果:AB4对Huh-7细胞的增殖抑制率随给药浓度的增加而增加,但50μmol/L后增加不明显,随作用时间的延长而增加,但作用24 h后增加不明显,AB4的IC50为(56.76±1.756)μmol/L。与阴性对照组比较,50μmol/L AB4作用Huh-7细胞24 h的克隆细胞数明显减少、Bcl-2蛋白表达明显减弱(P<0.05),细胞凋亡率和Bax、Caspase-3、Cleaved Caspase-3、Cleaved PARP蛋白表达均明显增加(P<0.05或P<0.01),且与阳性对照组差异无统计学意义。与阴性对照组比较,AB4低、中、高剂量组和阳性对照组荷瘤裸鼠的瘤体积明显减小(P<0.05),肿瘤细胞轮廓逐渐模糊,出现核固缩、核质不清晰、核碎裂现象,其抑瘤率分别为25.93%、39.15%、46.26%、42.83%。结论:AB4对Huh-7细胞及其荷瘤裸鼠均有抑制作用,其机制可能与上调Bax/Bcl-2比例、活化Caspase-3、裂解PARP、诱导细胞发生凋亡有关。     

栀子金花丸多指标成分HPLC含量测定方法研究

目的建立栀子金花丸中多指标性成分的高效液相色谱含量测定法,评价其质量。方法采用高效液相色谱法,ZORBAX Eclipse XDB-C_(18)反相色谱柱(250 mm×4.6 mm,i.d.,5μm),以乙腈(A)-水(含0.3%磷酸和0.2%三乙胺,B)为流动相梯度洗脱:0 min 5%A;10 min 15%A;70 min 30%A;85min 30%A;105 min 60%A;120 min 60%A。流速1.0 ml/min,检测波长270 nm,柱温为室温。结果在优选色谱条件下,栀子金花丸中栀子苷、黄芩苷、槲皮素、巴马汀、小檗碱、汉黄芩苷、黄芩素、大黄素和大黄酚分离良好,9种成分在选定浓度范围内线性关系良好(R~2≥0.999 7),日内、日间精密度、重复性和稳定性良好(RSD≤2.55%),加样回收率在90.85%~110.95%,并对14个批号的栀子金花丸中的9种指标成分进行了含量测定。结论建立了栀子金花丸HPLC质量控制方法,此法简便快速,稳定可靠。     

两种齐墩果酸纳米粒的体外细胞摄取研究

目的:研究人肝癌细胞株HepG2对同时包载齐墩果酸(OA)和香豆素6的乳酸羟基乙酸共聚物纳米粒(OCPN)和乳酸羟基乙酸共聚物-水溶性维生素E纳米粒(OCPTN)的体外摄取情况。方法:以超声乳化-溶剂挥发法制备OCPTN和OCPN,其中香豆素6为荧光标记物;采用高效液相色谱法测定两种纳米粒中香豆素6的载药量,体外测定HepG2细胞对分别含100、200、400μg/ml(低、中、高质量浓度)香豆素6的OCPTN、OCPN混悬液的摄取率,显微镜观察HepG2细胞对OCPTN的摄取情况。结果:OCPTN和OPTN中香豆素6的载药量分别为7.6%、6.3%;低、中、高质量浓度OCPTN的细胞摄取率为(62.1±1.2)%、(53.6±1.3)%、(40.9±1.5)%,分别是相同质量浓度OCPN的细胞摄取率[(36.8±1.5)%、(31.2±1.9)%、(22.4±1.3)%]的1.69、1.72、1.83倍;镜下观察OCPTN被HepG2细胞摄取,处于细胞核周围。结论:OCPN和OCPTN均能被HepG2细胞摄取,且OCPTN的被摄取性更强。     

两组治疗耐药慢性乙肝方案的最小成本分析

[目的]比较两组治疗拉米夫定耐药的慢性乙型肝炎的方案的有效性及经济性.[方法]选择门诊拉米夫定耐药的慢性乙型肝炎患者150例,A组75例,给予恩替卡韦(ETV)0.5 mg,口服1次/d;B组75例,给予阿德福韦酯(ADV) 10 mg及拉米夫定(LAM) 100 mg,口服1次/d.观察两组治疗效果,并采用最小成本法...     

新型冠状病毒肺炎患者血液CRP,CREA, ALB,IL-6 水平检测对疾病预后的应用价值分析

目的　探讨性别、年龄以及血液指标联合检测在预测新型冠状病毒肺炎（COVID-19）患者预后的应用价值。 方法　选择2020 年2~3 月在泰康同济（武汉）医院的145 例COVID-19 确诊患者,根据出院预后状况分为治愈组（130 例）和死亡组（15 例）,对两组患者的性别、年龄及血液中淋巴细胞绝对值（LYMPH）、C 反应蛋白（CRP）、肌酸 激酶MB 同工酶（CK-MB）、肌酐（CREA）、清蛋白（ALB）、白细胞介素6（IL-6）和降钙素原（PCT）表达水平 进行比较。应用多因素logistic 回归分析和受试者工作曲线（ROC 曲线）评价相关检测指标对COVID-19 预后的判断价值。 结果　治愈组、死亡组患者性别之间差异无统计学意义（χ ２=0.412,P ＞ 0.05）, 年龄之间差异有统计学意义（t =-4.341, P ＜ 0.05）, LYMPH,CRP,CK-MB,CREA,ALB,IL-6 和PCT 之间差异均有统计学意义（U =97.000~1 907.000, 均 P ＜ 0.05）,而经多因素logistic 回归分析仅筛选出CRP,CREA,ALB 和IL-6 四项是死亡的独立危险因素。CRP, CREA,ALB,IL-6 以及CRP+CREA+ALB+IL-6 联合检测的ROC 曲线下面积（AUC 值）分别为0.978,0.881,0.950, 0.979 和0.988,敏感度分别为100%,86.7%,91.5%,100% 和100%,特异度分别为93.8%,84.6%,86.7%,88.5% 和 95.4%。 结论　CRP,CREA,ALB 和IL-6 可以作为COVID-19 患者预后的判断指标,CRP+ALB+CRP+CREA 联合检 测能够提高COVID-19 患者预后的评估能力。     

人源5-羟色胺转运体稳定表达细胞系的建立及其功能探究

目的建立人源5-羟色胺转运体（human serotonin transporter,hSERT）稳定表达细胞系,并对细胞系hSERT的结合活性和重摄取功能进行初步研究。方法采用脂质体转染法将hSERT转染于母细胞,即人胚胎肾（human embryo kidney,HEK）293细胞,应用抗生素G418（800μg/ml）压力筛选,并采用RT-PCR和Western印迹法在基因和蛋白水平对HEK293-hSERT细胞系进行鉴定和稳定性验证;采用放射性配体结合实验检测其与氚标西酞普兰（[3H]-citalopram）的结合活性,并检测其对[3H]5-HT的重摄取功能。结果 RT-PCR和Western印迹结果表明,所建立的HEK293-hSERT细胞系在15代内（P1,P5,P10,P15）均稳定表达hSERT;放射配体结合实验表明,HEK293-hSERT细胞系与[3H]-西酞普兰具有明显的特异性结合;并且在100 nmol/L[3H]5-HT条件下,具有明显的5-HT重摄取功能,这一作用可被10μmol/L的氟西汀所阻断,而母细胞HEK293无此功能。结论本研究所建立的HEK293-hSERT细胞系可稳定表达SERT,并且具有内源性SERT的结合和重摄取功能,是一种稳定表达功能性hSERT的细胞系。     

蜂王浆对低钙条件下离体蟾蜍心脏心率和心肌收缩力的影响

目的 观察不同浓度蜂王浆溶液对离体蟾蜍心率和心肌收缩力的影响.方法 30只蟾蜍随机分为任氏液组、任氏液+蜂王浆组和低钙任氏液+蜂王浆组,每组10只.采用斯氏法制备离体蛙心灌流标本.对照组离体蟾蜍心脏只灌流任氏液,任氏液+蜂王浆组在离体蟾蜍心脏的灌流任氏液中加入蜂王浆溶液,低钙任氏液+蜂王浆组在离体蟾蜍心脏灌流低钙任氏液中加入蜂王浆溶液.通过蟾蜍心室外采用心室收缩波动、心室吸收药物的方法给药,心室外容积固定为1.0 ml,根据所需蜂王浆浓度计算出加入原浆蜂王浆的容积,每次加入蜂王浆后记录10～20 min.应用BL-420F生物机能实验系统记录的离体蟾蜍心肌收缩曲线,并进行心肌收缩力和心率的统计学分析.结果 任氏液+蜂王浆组与任氏液组比较,在1:5 000浓度时蜂王浆能明显抑制离体蟾蜍心脏的心率和心肌收缩力(P＜0.05);在1:500浓度时,蜂王浆可显著抑制离体蟾蜍心脏的心率和心肌收缩力,甚至心脏停止跳动呈剂量依赖关系;低钙任氏液+蜂王浆组与任氏液组比较,在1:10 000浓度时蜂王浆明显抑制离体蟾蜍心脏的心率和心肌收缩力(P＜0.05);在1:1 000浓度时,蜂王浆显著抑制离体蟾蜍心脏的心率和心肌收缩力,甚至心脏停止跳动呈剂量依赖关系.低钙任氏液+蜂王浆组与任氏液+蜂王浆组比较,在1:5 000浓度蜂王浆能明显抑制离体蟾蜍心脏的心率和心肌收缩力(P＜0.05).结论 在低钙条件下,蜂王浆对离体蟾蜍心脏活动的抑制比在正常钙任氏液条件下更容易出现.     

诃子提取物的抗菌活性研究

目的：考察中药诃子提取物的体外抗菌活性。方法分别用水乙酸乙酯及95％乙醇对诃子粉末进行提取,获得3种提取组分。以二倍稀释法测定3种提取组分对鲍曼不动杆菌大肠埃希菌肺炎克雷伯杆菌和金黄色葡萄球菌的最低抑菌浓度和最低杀菌浓度。采用同样方法考察提取物对临床分离的泛耐药鲍曼不动杆菌的抗菌作用。结果诃子的3种提取组分中水提取组分的抗菌活性最强;3种提取组分对4种致病菌均具有抑制和杀灭作用,对泛耐药鲍曼不动杆菌的作用最强。结论中药诃子提取物具有广泛的抗菌活性,有望用于细菌感染性疾病特别是耐药菌所致感染的治疗。     

自拟四味止血片质量标准的改进和完善

目的建立四味止血片的质量标准。方法采用薄层色谱法(TLC法)对四味止血片中益母草、地榆、丹参进行定性鉴别;采用高效液相层析(HPLC)测定丹参中丹参素钠的含量,色谱柱:Agilent SB-C_(18)(4.6×250 mm,5μm),流动相:乙腈-2%冰乙酸溶液(5∶95),流速0.8 ml/min,检测波长281 nm,柱温25℃。结果薄层鉴别中,供试品在与对照药材或对照品相应的位置上显相同颜色的斑点,阴性对照无干扰;丹参素钠的线性范围0.3980~3.9800μg,r=0.9999(n=7),平均回收率95.31%,RSD为2.17%(n=9)。结论该方法操作简便,结果准确可靠,重复性好,可作为四味止血片的质量控制方法。     

聚己内酯-吐温80共聚物纳米粒在神经胶质瘤化疗中的应用

目的 研究新型载多西紫杉醇聚己内酯-吐温80共聚物(PCL-Tween 80)纳米粒在神经胶质瘤化疗中的应用.方法 以PCL-Tween 80和聚己内酯为材料,利用改良的溶剂萃取/挥发方法制备载多西紫杉醇纳米粒并进行性质表征.利用激光共聚焦显微镜观察纳米粒的细胞摄取情况,并利用噻唑蓝(MTT)法测定纳米粒对C6细胞的细胞毒作用.结果 载药纳米粒呈球形,粒径约为200 nm.PCL-Tween 80纳米粒的载药量为10%,28 d内可以释放包裹药物的34.90%.与同浓度的泰素帝(Taxotere(R))比较,载多西紫杉醇PCL-Tween 80纳米粒对C6细胞的细胞毒性作用更强.结论 载多西紫杉醇PCL-Tween 80纳米粒用于神经胶质瘤的化疗极具应用前景.